細胞簡介：

產品名稱 兔精原干細胞

簡稱 SSCs

組織來源 睪丸組織

產品規格 5×10^5cells/T25

細胞簡介 兔精原干細胞分離自睪丸組織；睪丸是雄性生殖器官，也叫精巢，具體結構包括生精小管以及周圍的結締組織。生精小管也叫曲精小管、曲細精管，是睪丸上細長而彎曲的管道。精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內的群生精干細胞，是成體內的定向干細胞。精原干細胞的些獨特優勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調節機制的深入研究，精子發生機理的進步闡明以及精原干細胞轉染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養。在哺乳動睪丸內，精子發生時個受高度調控和持續的過程，精原干細胞（SSCs）方面進行自我更新持干細胞數量，另方面又不斷執行分化成各級生精細胞直至后生成精子。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發生的原始細胞，也是動物體內起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養體系的建立，在生物學、醫學、畜牧業生產及制備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下代的成體干細胞。

方法簡介 實驗室分離的兔精原干細胞采用先機械吹打、后消化，結合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的兔精原干細胞經c-kit免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 兔精原干細胞培養基(基礎培養基，含FBS、bFGF、GDNF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 梭形、圓形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。