細胞簡介：

產品名稱 人胰腺癌組織源星狀細胞

組織來源 胰腺癌組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人胰腺癌組織源星狀細胞分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織；胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90%為起源于腺管上皮的導管腺癌。其發病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率<1%，是預后差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術死亡率較高，而很低。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其發生與吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、過量飲用咖啡、環境污染及遺傳因素有關；近年來的調查報告發現糖尿病人群中胰腺癌的發病率明顯高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發病存在一定關系，發現慢性胰腺炎病人發生胰腺癌的比例明顯增高；另外還有許多因素與此病的發生有一定關系，如職業、環境、地理等。隨著醫學技術的進步，大部分癌癥的生存率都在提高，例如乳腺癌，結直腸癌等腫瘤，近幾十年來，生存率得到了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前，缺乏有效的治療方法，高的死亡率使其成為“癌中王"，近年來胰腺癌微環境的研究引起了諸多學者的重視。胰腺癌微環境構成復雜，其中，胰腺星狀細胞是胰腺癌微環境中重要的間質細胞之一，在胰腺癌細胞生長、遷移、侵襲、血管生成、免疫逃逸、轉移及耐藥中發揮重要的作用。因此針對胰腺星狀細胞和胰腺癌細胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預后。胰腺星狀細胞（pancreaticstellate cells, PSC）是一種胰腺特異性間質細胞，多在胰腺組織內血管和導管周圍聚集，環繞在腺泡的基底部位，正常靜比狀態下只占胰腺細胞的4%左右，細胞質中含有豐富的生素A脂滴，以表達膠質纖絲酸性蛋白質（glial filament acidic protein, GFAP）、結合蛋白（Desmin）為特征。在胰腺組織損傷、應激等條件下PSC被激活，成為一種肌成纖細胞，胞質中富含生素A的脂滴消失，以表達α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）為標志，能大量合成細胞外基質（extracellular matrix, ECM）和分泌多種細胞因子。胰腺癌微環境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發生發展中起著重要作用。PSC通過誘導胰腺癌細胞（pancreatic cancercells, PCC）上皮一間質轉變（epithelial-mesenchymaltransition, EMT）促進胰腺癌侵襲和轉移侵襲和轉移是腫瘤細胞脫離原發腫瘤灶到達靶器官的一個多步驟過程，眾多研究表明EMT與胰腺癌的侵襲轉移密切相關。EMT主要的特征是上皮細胞特征丟失同時伴間質細胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白（E-cadherin）表達下降，波形蛋白（Vimentin）表達上調。karnevi等研究發現，PSC與PCC共培養后能夠誘導PCC上皮性細胞標志（E-cadherin, β-catenin）丟失，促進間質性細胞標志（Vimentin, Snai-1）獲得，表明PSC在PCC的EMT形成過程中發揮了重要的作用。PSC參與胰腺癌進展的各個環節，而PSC活化是PSC發揮功能的重要部分。因此，如能抑制PSC活化或控制PSC細胞功能將為胰腺癌治療提供潛在的治療策略。因此，隨著針對抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望從胰腺癌微環境角度切實提高胰腺癌的治療效果。

方法簡介 實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀細胞采用膠原酶消化法結合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀細胞經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 人胰腺癌組織源星狀細胞培養基(含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。