細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 人輸尿管上皮細(xì)胞

組織來(lái)源 尿道組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人輸尿管上皮細(xì)胞分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對(duì)細(xì)長(zhǎng)的管道，呈扁圓柱狀，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆。輸尿管有三個(gè)狹窄部：一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處（輸尿管起始處）；一個(gè)在越過(guò)小骨盆入口處；后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu)，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管。臨床上將輸尿管分為上、中、下三段，也可稱為腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動(dòng)脈處；盆段，自髂動(dòng)脈到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜、輸尿管開(kāi)口。輸尿管管壁分為4層，黏膜層、固有層、肌層、外膜。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細(xì)胞；固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成；外膜為疏松結(jié)締組織，營(yíng)養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。其中，輸尿管上皮細(xì)胞主要分布于黏膜層。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人輸尿管上皮細(xì)胞采用先消化、然后機(jī)械分離法使輸尿管分層、后膠原酶消化，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人輸尿管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 人輸尿管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。