商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人呼吸道上皮細胞

組織來源 呼吸道

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人呼吸道上皮細胞分離自呼吸道；呼吸道是肺呼吸時氣流所經過的通道，有肺脊椎動物的呼吸道分上、下兩部：鼻、咽和喉合稱上呼吸道。氣管及其以后一分再分的管道，合稱為下呼吸道，或稱為氣管樹。氣管樹是隨著動物的進化逐漸復雜化的。整個呼吸道內表面都分布有分泌液和纖毛（鼻孔、咽后壁和聲帶黏膜除外），它能溫暖（或冷卻）、濕潤和凈化吸入的空氣，對于呼吸器官和機體有著保護作用。呼吸道以骨或軟骨做支架，其內表面覆蓋著黏膜，黏膜內分布著豐富的毛細血管。呼吸道上皮細胞屬于假復層纖毛柱狀上皮，分布于呼吸道的內表面，主要由柱狀，杯形，梭形和錐形等不同形狀細胞組成。看上去像復層上皮，但實際上所有細胞底部均附于基膜上，屬單層上皮，故稱假復層柱狀上皮，上皮表面有纖毛，杯狀細胞可分泌粘液，包裹著大量細菌，借助纖毛不斷擺動將其慢慢移動至出消化道。

方法簡介 實驗室分離的人呼吸道上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人呼吸道上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養基： 人呼吸道上皮細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 上皮細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液：0.25%

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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