細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 大鼠嗅球細(xì)胞

組織來源 嗅球組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 大鼠嗅球細(xì)胞分離自嗅球組織；嗅球是脊椎動(dòng)物前腦結(jié)構(gòu)中參與嗅覺的部分，用于感知?dú)馕丁Ｐ崆蚍譃槎€(gè)不同的結(jié)構(gòu)：主嗅球及輔助嗅球。在大腦額葉來自許多嗅細(xì)胞的神經(jīng)纖維纏集在一起，形成線球狀的部分。在這里，纖維與多個(gè)次級(jí)神經(jīng)元——僧帽細(xì)胞的樹突相連接，進(jìn)而由這里伸出神經(jīng)纖維形成嗅囊，終止于額葉下方。一般認(rèn)為它在嗅味的辨別中具有重要的功能。對(duì)于大部份的脊椎動(dòng)物而言，嗅球位在大腦的前面，不過人的嗅球位于大腦的內(nèi)部。嗅球由篩骨的篩板固定且保護(hù)嗅球，哺乳動(dòng)物的篩板會(huì)分隔嗅球和嗅上皮，而嗅神經(jīng)會(huì)穿過篩板中的篩孔而連接到嗅球。嗅球分為二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)：主嗅球及輔助嗅球。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅球細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅球細(xì)胞經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、 多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）

培養(yǎng)基： 大鼠嗅球細(xì)胞培養(yǎng)基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2天半量換液1次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。