商品屬性：

產(chǎn)品名稱 大鼠附睪上皮細(xì)胞

組織來源 附睪

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 大鼠附睪上皮細(xì)胞分離自附睪組織；附睪（Epididymis）是一個(gè)由曲折、細(xì)小的管子構(gòu)成的器官，一端接著輸精管（Ductusdeferens），一端接著睪丸（Testis）的曲細(xì)精管，具體結(jié)構(gòu)主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣，可分為頭、體、尾三部。精子離開睪丸后通過輸出小管進(jìn)入附睪。附睪具有暫存精液并分泌附睪液營(yíng)養(yǎng)精子的功能，以促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟附睪的功能是暫存精子，促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟。精子在附睪內(nèi)獲得運(yùn)動(dòng)能力，總共停留8-17天，終達(dá)到功能上的成熟。在這個(gè)過程中，精子除了自身的因素，還受到附睪微環(huán)境的影響，這包括了一系列的物理、化學(xué)變化和精子形態(tài)的改變。可以說，附睪微環(huán)境正常穩(wěn)定是附睪發(fā)揮促成熟這一功能的必要條件。若附睪的功能發(fā)生異常，精子則不能成熟，引起不育。附睪上皮含有主細(xì)胞、基細(xì)胞、亮細(xì)胞等幾種類型細(xì)胞。基細(xì)胞，其頂部離附睪管腔有一定距離，在附睪各部分，其形態(tài)沒有差別，一般認(rèn)為是貯備細(xì)胞；另一種主細(xì)胞，是維持附睪生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，在各區(qū)段的主細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別很大，這也反映出各區(qū)段的生理功能的差異。除上皮細(xì)胞外，附睪的管壁組織結(jié)構(gòu)也有規(guī)律性的變化，附睪管起始段平滑肌有自發(fā)地節(jié)律性收縮，而尾部平滑肌就沒有這種特點(diǎn)，僅在射精一瞬間出現(xiàn)強(qiáng)烈的節(jié)律收縮。作為負(fù)責(zé)提供適合精子成熟微環(huán)境的附睪，具有活躍的分泌與吸收功能。其中，附睪上皮的電解質(zhì)和水分的轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)保持附睪內(nèi)合適的離子濃度和酸堿度，為精子成熟提供適宜的環(huán)境起著相當(dāng)重要的作用。睪丸的支持細(xì)胞每天能產(chǎn)生大量睪網(wǎng)液，如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網(wǎng)液，而從附睪排出的只不過幾百微升，也就是說睪丸分泌液有99%被附睪上皮重新吸收回體內(nèi)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，結(jié)扎輸精管時(shí)睪丸不會(huì)腫脹，但若結(jié)扎睪丸輸出小管，睪丸第二天就會(huì)腫脹，這就充分證實(shí)了附睪存在著強(qiáng)有力的吸收功能，但是重新吸收的意義尚不清楚。體外培養(yǎng)附睪上皮細(xì)胞對(duì)精子的發(fā)育、成熟，附睪生理基礎(chǔ)功能研究具有重要意義。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠附睪上皮細(xì)胞采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠附睪上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 大鼠附睪上皮細(xì)胞培養(yǎng)基(含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液： 0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

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取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

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原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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