商品屬性：

產品信息：

產品名稱 兔椎間盤髓核細胞

簡稱 NPCs

組織來源 椎間盤組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔椎間盤髓核細胞分離椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，分為部的髓核，富于彈性的膠狀物質；周圍部的纖環，由多層纖軟骨環按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖環起將髓核密封起來。纖環由膠原纖束的纖軟骨構成，位于髓核的四周。纖環的纖束相互斜行交叉重疊，使纖環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結構的部分，位于兩軟骨板與纖環之間。由縱橫交錯的纖網狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的，至成年時位置移至椎間盤的中后部；在成年以前構成髓核的主要物質是大量蛋白多糖復合體、膠原纖和纖軟骨，隨著年齡的增長，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖軟骨所替代。

方法簡介 實驗室分離的兔椎間盤髓核細胞采用膠原酶-混合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的兔椎間盤髓核細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 兔椎間盤髓核細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每3-4天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液： 0.25%

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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