蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

補體成分9(C9)重組蛋白英文名稱：Recombinant Complement Component 9 (C9)Homo sapiens (Human，人)

腸激酶(ENTK)重組蛋白英文名稱：Recombinant Enterokinase (ENTK)Mus musculus (Mouse，小鼠)

腸堿性磷酸酶(ALPI)重組蛋白英文名稱：Recombinant Alkaline Phosphatase, Intestinal (ALPI)Homo sapiens (Human，人)

腸細胞激酶(ICK)重組蛋白英文名稱：Recombinant Intestinal Cell Kinase (ICK)Mus musculus (Mouse，小鼠)   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復(fù)，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
SLD5產(chǎn)品名稱: SLD5蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

應(yīng)用類型: Other英文名稱: 2-Hydroxyisobutyryl-Histone H3 (Lys14)標(biāo)記: Unconjugated

HBS1L產(chǎn)品名稱: hbs1樣蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Rabbit

Kv4.2產(chǎn)品名稱: 電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

C1orf85產(chǎn)品名稱: 1號染色體開放閱讀框85抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Sheep

ETFA產(chǎn)品名稱: 電子轉(zhuǎn)移黃su蛋白α抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

INTS5產(chǎn)品名稱: INTS5蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep, Chimpanzee

phospho-PDCD4 (Ser67)產(chǎn)品名稱: 凋亡相關(guān)蛋白4抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

應(yīng)用類型: Other英文名稱: phospho-eIF4EBP1 (Thr37 / Thr46)英文別名: Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1; 4E-BP1; eIF4E-binding protein 1; Phosphorylated heat- and acid-stable protein regulated by insulin 1 (PHAS-I); 4EBP1_HUMAN.

CDHR3產(chǎn)品名稱: 鈣粘樣蛋白28抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Horse   

ATP酶蛋白酶體26S亞基3(PSMC3)重組蛋白人核仁磷suan蛋白3(NPM3)ELISA試劑盒NPM3核仁磷suan蛋白3elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Nucleophosmin 3(NPM3)ELISA Kit

人核仁磷suan蛋白2(NPM2)ELISA試劑盒NPM2核仁磷suan蛋白2elisa檢測試劑盒Human Nucleophosmin 2(NPM2)ELISA Kit

人核仁蛋白9(NOL9)ELISA試劑盒NOL9核仁蛋白9elisa kitHuman Nucleolar Protein 9(NOL9)ELISA Kit

人核仁蛋白8(NOL8)ELISA試劑盒NOL8核仁蛋白8ELISA試劑盒Human Nucleolar Protein 8(NOL8)ELISA Kit

人核仁蛋白7(NOL7)ELISA試劑盒NOL7核仁蛋白7elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Nucleolar Protein 7(NOL7)ELISA Kit