酶聯免疫試劑盒的核心在于抗原抗體反應的特異性。當抗原與相應抗體相遇時,它們能夠像鑰匙與鎖一樣準確匹配并結合。在試劑盒中,先將已知的抗原或抗體固定于固相載體(如聚苯乙烯微量板),形成固相成分。然后加入待測樣本,若樣本中存在相應的抗體或抗原,就會與固相成分發生特異性結合,形成復合物。接著再加入酶標抗體(或抗原),使其與已結合在固相上的抗原(或抗體)進一步結合,此時酶也固定在了固相上。加入底物,酶會催化底物發生顯色反應,通過檢測顏色的深淺即可判斷樣本中目標物質的存在與否及含量情況。
酶聯免疫試劑盒的組成部分:
1.包被板:這是試劑盒的重要組成部分,通常采用聚苯乙烯微量板作為固相載體。其表面經過特殊處理,能夠使抗原或抗體牢固地附著在上面,為后續的免疫反應提供穩定的場所。
2.酶標抗體(或抗原):它是將酶與抗體(或抗原)通過化學方法偶聯在一起的結合物。其中的抗體(或抗原)具有特異性識別目標抗原(或抗體)的能力,而酶則能在后續的反應中催化底物顯色,從而實現對免疫反應的可視化檢測。
3.底物:是酶作用的對象,在酶的催化下會發生顯色反應,產生易于觀察的顏色變化,以便確定免疫反應是否發生以及反應的程度。
4.標準品:具有已知濃度的一系列物質,用于繪制標準曲線。在檢測過程中,將標準品與待測樣本在相同條件下進行檢測,通過比較待測樣本的顯色程度與標準品的顯色程度,從而確定待測樣本中目標物質的濃度。
5.樣本稀釋液:用于對樣本進行稀釋,保證樣本的性質穩定,同時使稀釋后的樣本符合檢測的要求,確保檢測結果的準確性。
6.洗滌液:用于清洗反應過程中未結合的成分,去除雜質和多余的物質,減少非特異性反應的發生,提高檢測的特異性和準確性。