ELISA試劑盒實驗操作因素

1 加樣

加樣器是一種比較精密的工具，其在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內附著的血痂等原因造成加樣不準，因此必須定期對加液器進行維護和校準。每次加不同的標本均需更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染；加樣速度不可太快，以免將標本加在孔壁上部，并注意不要濺出或產生氣泡，加樣時還應注意操作時差對結果的影響，尤其對競爭法檢測結果影響更大。因此建議在加酶結合物和底物時用多道加液器，或者雙人同時加樣以減少操作時差對結果的影響，另外有些項目在檢測前需要稀釋以減少非特異性反應。稀釋的方式非常重要，*方式是采用振蕩器混勻，不可隨意改變混勻方式。

2 溫育

2.1溫育的溫度：育常采用的溫度有43 、37℃、室溫或4℃等。37℃是實驗室中常用的溫育溫度，也是大多數抗原抗體結合的zui適反應溫度?？乖贵w反應一般在37℃經1～2 h 產物的生成可達，為加速反應，可在一定范圍內提高反應的溫度并在反應過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率?？乖贵w反應在4℃更為*，形成的產物更多、更穩(wěn)定，但因所需時間太長，在ELISA檢測中一般不予采用。

2.2溫育的方式：溫育方式常采用溫箱法、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結果的吸光度差異（即“邊緣效應”）?？蓪LISA板置于水浴箱中，板底應貼著水面，使溫度迅速平衡，為避免蒸發(fā)，可用塑料貼封紙覆蓋板孔。若用溫箱，ELISA板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料（如金屬等），在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。溫育過程中每塊反應板不能重疊放置，防止溫度擴散的不均勻性。